克隆形成实验(克隆形成实验步骤)

平板克隆形成和软琼脂克隆形成的区别平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验的区别1).细胞培养至70%贴壁时准备试验,试验前夜更换培养液;2).称取两份1g低熔点琼脂糖胶,分别置入新鲜制备的miliq水,配成10%和2%,高压灭菌,维持于40℃勿使冷却凝固;3).取少量含10%fbs的rpmi1640培养液,预热至37℃;4).将维持于

平板克隆形成和软琼脂克隆形成的区别

平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验的区别1).细胞培养至70%贴壁时准备试验,试验前夜更换培养液; 2). 称取两份1g 低熔点琼脂糖胶,分别置入新鲜制备的miliq水,配成10%和2%,高压灭菌,维持于40℃勿使冷却凝固; 3). 取少量含10%fbs的rpmi1640培养液,预热至37℃; 4). 将维持于40的10%低熔点胶溶液按10:1比例与预热至37℃rpmi1640培养液混合,取5ml,置入直径为6cm的无菌培养皿中,冷却凝固,至于37℃,5% co2培养箱中备用; 5). 将培养中细胞用0.25%胰酶消化成单个细胞,20℃ 800′g离心15min,轻轻倒掉上清; 6). 用少量10% fbs+rpmi1640 将细胞吹打悬起;计数;稀释500 cell/ml; 7). 将维持于40c的2% 低熔点胶溶液按10:1比例与细胞悬液混合,充分混匀后取2ml注入步骤4).中制备的底层琼脂糖上; 8). 待加入的琼脂糖凝固后,置于37℃,5% co2培养箱中; 9). 将维持于40的2% 低熔点胶溶液按10:1比例与10% fbs+rpmi1640混合,充分混匀后取1ml注入步骤7).中制备的琼脂糖上; 10). 待加入的琼脂糖凝固后,再加入5ml10% fbs+rpmi1640; 11). 置于37℃,5% co2培养箱中培养7天;转化的la795(mage-a3)细胞和la795细胞各作3份; 12). 观察形成的细胞集落;并计数克隆形成率: 13). 两组细胞克隆形成率,以配对样本的秩和检验作统计分析;以spss 10.0辅助计算;p< 0.05视为差别有显著性的依据;

细胞平板克隆形成实验培养基要加双抗吗

应该不用吧。

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